الکالین فسفاتاز یک آنزیم هیدرولاز است که مسئول حذف گروه های فسفات از انواع متعددی از مولکولها نظیر نوکلئوتیدها، پروتئینها و الکالوئیدها میباشد. این روش در ارزیابی میزان واکنشهای التهابی در بافتهای مختلف مورد استفاده قرار میگیرد و اساس آن بر پایه تولید رنگ قهوهای تیره توسط فسفات کلسیم آزاد شده به واسطه واکنش آنزیمی در حضور نیترات کبالت و سولفید آمونیوم میباشد. از آنجا که فرایند ثبوت و پاساژ بافتی موجب آسیب به این آنزیم میگردد مطالعه فعالیت آنزیم الکالین فسفاتاز بر روی برشهای انجمادی تهیه شده از نمونههای بافتی تازه صورت پذیرفت (Bakst et al., 2007) .
۲۱-۲) آنالیز و تحلیل داده ها
محاسبه آماری با بهره گرفتن از نرم افزار آماری SPSS نسخه ۱۶ انجام شد و برای مقایسه میانگین بین گروه ها از آنالیز واریانس یک طرفه و تست تعقیبی Tukey استفاده شد (p<0.05) به عنوان معیار معنی دار بودن اختلاف ها در نظر گرفته شد.
( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )
*فصل سوم
نتایج و یافته ها
علائم اختصاری بکار برده شده در نمودارهای مربوط به گروه های تحت تیمار
Con: گروه کنترل، Cyc25: گروه سیکلوسپورین روز ۲۵، Cyc45 : گروه سیکلوسپورین روز ۴۵ ، Cyc+GSE25 : گروه سیکلوسپورین + عصاره هسته انگور روز ۲۵، GSE45+Cyc : گروه سیکلوسپورین + عصاره هسته انگور روز ۴۵،Cyc+ HE25: گروه سیکلوسپورین+ عصاره زالزالک روز ۲۵،: Cyc+ HE45 گروه سیکلوسپورین + عصاره زالزالک روز ۴۵
۱-۳) نتایج حاصل از پارامترهای مختلف اسپرم
۱-۱-۳) نتایج حاصل از شمارش اسپرم در اپیدیدیم
طبق نمودار( ۱-۳ ) تعداد اسپرمهای اپیدیدیمی در گروه های تحت تیمار با سیکلوسپورینآ در روزهای ۲۵ و ۴۵ به طور معنی داری در سطح p<0.05 نسبت به گروه کنترل کاهش یافت. در گروههایی که عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور را بمدت ۲۵ روز دریافت کردند تعداد اسپرمهای ایجاد شده تا حدی بهبود حاصل کرد به طوری که دارای تفاوت معنیدار با گروهی که بمدت ۴۵ روز سیکلوسپورینآ را دریافت کردند بود ولی با گروه سیکلوسپورین ۲۵ اختلاف آماری معنیداری نداشتند. در گروه های عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور روز ۴۵ روند بهبود تا حدی پیشرفت کرد که در پایان روز ۴۵ تفاوت معنیداری در سطح p<0.05 بین این دو گروه با گروه کنترل نبود.
نمودار۱-۳: مقایسه میانگین تعداد اسپرم در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۲-۱-۳) نتایج حاصل از مطالعه میزان اسپرم زنده
طبق نمودار(۲-۳) درصد اسپرمهای زنده در گروه تیمار شده با سیکلوسپورینآ نسبت به گروه کنترل کاهش یافته اما این کاهش در سطح p<0.05 معنیدار نبوده و با مصرف عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور همراه با سیکلوسپورینآ ، همین مقدار کاهش نیز بهبود یافته است و در روز ۴۵ هیچ گونه اختلاف معنیداری بین گروه دریافت کننده عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور با گروه کنترل در سطح p<0.05 مشاهده نشد(P>0.05).
نمودار۲-۳: مقایسه میانگین درصد اسپرمهای زنده در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۳-۱-۳) نتایج حاصل از شمارش اسپرمهای نابالغ
طبق نمودار(۳-۳) درصد اسپرمهای نابالغ در گروهی که بمدت ۴۵ روز سیکلوسپورینآ دریافت کرده، نسبت به سایر گروه ها دارای اختلاف معنیداری در سطح p<0.05 با گروه کنترل میباشد. با مصرف عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور به عنوان آنتی اکسیدان درصد تولید اسپرمهای نابالغ کاهش یافت ، به طوری که گروه های دریافت کننده عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور در روز ۲۵و ۴۵ اختلاف معنیداری در سطح p<0.05 با گروه کنترل ندارند (P>0.05).
نمودار۳-۳: مقایسه میانگین درصد اسپرمهای نابالغ در گروه های تحت تیمار
* نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۴-۱-۳) نتایج حاصل از مطالعه کروماتین اسپرم
طبق نمودار (۴-۳) درصد اسپرمهای با کروماتین آسیبدیده در گروهی که سیکلوسپورین آ را بمدت ۲۵ روز دریافت کرده است افزایش یافته اما میزان افزایش نسبت به گروه کنترل در سطح p<0.05 معنیدار نمی باشد اما در گروه سیکلوسپورینآ روز ۴۵ درصد اسپرمهای با کروماتین آسیبدیده به طور معنیداری در سطح p<0.05نسبت به گروه کنترل افزایش یافته است. با مصرف همزمان عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور با داروی سیکلوسپورینآ این درصد کاهش یافته و در نهایت با گروه کنترل دارای اختلاف معنیداری در سطح p<0.05 نمی باشد(P>0.05).
نمودار۴-۳: مقایسه میانگین درصد اسپرمهای با کروماتین آسیب دیده در گروه های تحت تیمار
* نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
تصویر ۱-۳) اسپرمهای رت رنگ آمیزی شده با روش ائوزین نگروزین جهت ارزیابی قابلیت زنده ماندن اسپرم، اسپرمهای زنده (بی رنگ) و اسپرمهای مرده (رنگ گرفته)
تصویر۲-۳) اسپرمهای با مورفولوژی طبیعی رت رنگآمیزی شده با روش رنگ آمیزی هماتوکسیلین برای ارزیابی مورفولوژی اسپرم
۲-۳) نتایج حاصل از مطالعه پارامترهای مختلف لقاح (IVF)
۱-۲-۳) نتایج حاصل از تعداد اووسیتهای لقاح یافته در گروه های مختلف آزمایش
طبق نمودار (۹-۳) به دنبال تجویز سیکلوسپورینآ تعداد اووسیتهای لقاح یافته در گروه های تحت تیمار که سیکلوسپورین آ را به مدت ۲۵ و ۴۵ روز دریافت کردند کاهش معنیداری را در سطح p<0.05 نسبت به گروه کنترل نشان می دهند. در گروههایی که علاوه بر سیکلوسپورین، عصاره هسته انگور را دریافت کردند، در تعداد اووسیتهای لقاح یافته بهبود حاصل شد به طوری که در روزهای ۲۵و۴۵ اختلاف معنیداری بین این دو گروه و گروه کنترل در سطح p<0.05 وجود نداشت. اما گروهی که علاوه بر سیکلوسپورین، عصاره زالزالک را دریافت کرد بهبودی به میزان کمتری حاصل شد به طوری که در روزهای ۲۵و ۴۵ اختلاف معنی داری بین این گروه و گروه کنترل در سطح p<0.05 مشاهده شد.
نمودار۹-۳: مقایسه میانگین درصد اووسیتهای لقاح یافته در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۲-۲-۳) نتایج حاصل از تعداد جنینهای دوسلولی
طبق نمودار(۱۰-۳) تعداد جنین ۲ سلولی در گروه کنترل دارای تفاوت معنیدار با گروه های تیمار شده با سیکلوسپورینآ در سطح p<0.05 میباشد. به طوری که در گروه های تحت تیمار تا حد زیادی درصد جنینهای دو سلولی کاهش پیدا کرده است. در گروههایی که علاوه بر سیکلوسپورین عصاره هسته انگور و عصاره زالزالک را دریافت کردند روند بهبود بخشی حاصل شد، به طوری که در پایان روز ۴۵ این گروها اختلاف معنیداری با گروه سیکلوسپورین روز ۴۵ در سطح p<0.05 داشته و با گروه کنترل و سیکلوسپورین روز ۲۵ هیچ گونه اختلاف آماری معنیداری در سطح p<0.05 نداشتهاند(P>0.05).
.
نمودار ۱۰-۳: مقایسه میانگین درصد جنینهای دوسلولی در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است
۳-۲-۳) نتایج حاصل از تعداد بلاستوسیست
طبق نمودار (۱۱-۳ ) تعداد بلاستوسیستها در گروه های تحت تیمار با سیکلوسپورین در روزهای ۲۵ و ۴۵ دارای اختلاف معنیداری با گروه کنترل در سطح p<0.05 است به طوری که در این گروه ها درصد بلاستوسیستها تا حد زیادی کاهش یافته است. در گروه های تحت تیمار که همراه با سیکلوسپورینآ عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور را دریافت کردند ، این پارامتر بهبود یافت به طوری که این گروه ها دارای اختلاف معنیداری با گروه سیکلوسپورین میباشند ، درحالی که هیچ گونه اختلاف آماری معنی داری با گروه کنترل در سطح p<0.05 ندارند(P>0.05).
نمودار ۱۱-۳: مقایسه میانگین درصد بلاستوسیستها در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۴-۲-۳) نتایج حاصل از تعداد جنینهای ارست شده
طبق نمودار( ۱۲-۳ ) درصد جنین ارست شده در گروهی که به مدت ۲۵ روز داروی سیکلوسپورین را دریافت کرده است دارای تفاوت معنیداری با گروه کنترل در سطح p<0.05 نمی باشد. اما با ادامه تیمار، درصد جنینهای ارست شده در گروه سیکلوسپورین روز ۴۵ اختلاف معنیداری در سطح p<0.05با گروه کنترل نشان می دهند. همچنین در گروه های سیکلوسپورین + عصاره هسته انگور ، در روزهای ۲۵ و ۴۵ اختلاف معنیداری در درصد جنینهای ارست شده با گروه کنترل مشاهده نشد. و در گروه سیکلوسپورین + عصاره زالزالک در روز ۲۵ تعداد جنینهای ارست شده نسبت به گروه کنترل افزایش قابل ملاحظه ای را نشان داد اما با ادامه تیمار در روز ۴۵ درصد جنین های ارست شده کاهش یافت طوری که اختلاف معنیداری در سطح p<0.05 بین این گروه وگروه کنترل مشاهده نشد (P>0.05).
.
نمودار۱۲-۳: مقایسه میانگین درصد جنینهای ارست شده در گروه های تحت تیمار
* نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۵-۲-۳) نتایج حاصل از تعداد جنینهای تیپ ۱
طبق نمودار( ۱۳-۳ ) درصد جنین تیپ ۱ (جنینهایی با کیفیت بد) در گروهی که به مدت ۲۵ روز داروی سیکلوسپورین را دریافت کردهاست دارای تفاوت معنیداری با گروه کنترل نمی باشد. اما با ادامه تیمار در گروههایی که سیکلوسپورین را به مدت ۴۵ روز دریافت کرده اند به طور قابل ملاحظهای افزایش یافت و دارای تفاوت معنیدار با گروه کنترل در سطح p<0.05 میباشند . در گروههایی که علاوه بر سیکلوسپورین عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور را دریافت کرده اند در روز ۲۵ به مقدار کمی بهبودی حاصل شد، طوری که بین گروه های روز ۲۵ و کنترل اختلاف معنیدار در سطح p<0.05 مشاهده شد. اما با ادامه تیمار با عصاره هسته انگور و زالزالک در روز ۴۵ بهبودی زیاد حاصل شد و بین گروه های روز ۴۵ و کنترل اختلاف معنیداری در سطح p<0.05 وجود نداشت(P>0.05).
نمودار۱۳-۳: مقایسه میانگین درصد جنینهای تیپ ۱ در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۶-۲-۳) نتایج حاصل از جنینهای تیپ ۲
طبق نمودار (۱۴-۳) درصد جنینهای تیپ۲ (جنین هایی با کیفیت متوسط) در گروهی که سیکلوسپورین آ را دریافت کرده است (روزهای ۲۵ و ۴۵) افزایش یافته است ، به طوری که دارای تفاوت معنیدار با گروه کنترل در سطح p<0.05 می باشند. با مصرف عصاره زالزالک و عصاره هسته انگور تعداد جنینها کاهش مییابد و در روز ۲۵ و ۴۵ دارای اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 با گروه کنترل نمیباشند(P>0.05).
نمودار۱۴-۳ : مقایسه میانگین درصد جنینهای تیپ ۲ در گروه های تحت تیمار
* نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
۶-۲-۳) تنایج حاصل از تعداد جنینهای تیپ ۳
طبق نمودار (۱۵-۳) گروههایی که سیکلوسپورینآ را به مدت ۲۵ و ۴۵ روز دریافت کردند کاهش معنیداری در درصد جنینهای تیپ ۳ (جنینهای با کیفیت خوب) را نشان دادهاند و با گروه کنترل دارای اختلاف آماری معنیداری در سطح p<0.05 میباشند. استفاده از عصاره هسته انگور و عصاره زالزالک باعث بروز روند بهبود بخش در این نوع جنینها شده به طوری که در روز ۴۵ هیچ گونه اختلاف آماری معنیداری در سطح p<0.05 بین گروه های سیکلوسپورین + زالزالک و سیکلوسپورین + عصاره هسته انگور روز ۴۵ با گروه کنترل وجود نداشت(P>0.05).
نمودار۱۵-۳: مقایسه جنینهای تیپ ۳ در گروه های تحت تیمار
حروف غیریکسان نشان دهنده اختلاف آماری معنیدار در سطح p<0.05 است.
تصویر ۳-۳) اووسیت به همراه توده کومولوسی در پیرامون آن (Coc[41]) جهت انجام پروسه IVF
