(۶) منبع تغذیه بر روی ولتاژ ٩٠ تنظیم شد و پس از مدت ٢٠ دقیقه جریان قطع گردید و بر روی دستگاه ترانس لومیناتور و با کمک نور UV مشاهده شد.
۴-٣) ژنوتایپ کردن نمونه ها)ژنوتایپینگ)
واکنش زنجیره­ای پلیمر از (PCR)
PCR روش بسط آنزیمی یک قطعه از DNA هدف است که بین دو بخش الیگونوکلئوتیدی قرار دارد. این واکنش به منظور ایجاد مقادیر نامحدود باز یک توالی مورد نظر می­باشد. درواقع PCRمی­تواند از یک مولکول منفرد از DNA در مدت چند ساعت چندین بیلیون ملکول را تولید کند. این روش هم درتشخیص مولکولی و هم درآنالیز مولکولی بیماریهای ژنتیکی انقلابی به وجود آورده است.
روش (ARMS/PCR) Amplification Refractory Mutations Systemیک روش نسبتاً ساده سریع جهت تعیین جهش­های نقطه­ای، حذف و اضافه شدن چند نوکلتوئیدی و چند شکلی­های پلی مورفیسم (Polymorphism) است. این تکنیک سنجش دو لوله­ای با پرایمرهای طبیعی و جهش یافته در واکنش­های جداگانه می باشد که با پرایمرهای کنترلی همراه می­باشد تا از انجام واکنش PCR اطمینان حاصل شود. (۴۵)
در (Tetra ARMS/PCR) Tetra Primer Amplificati Refractory Mutations Systemبرای تشخیص یک جهش ویژه، یک جفت آغازگرکنترل در طرفین محل موتاسیون برای اطمینان از عملکرد صحیح PCR طراحی می­ شود. برای تکثیر منطقه حاوی جهش نیز از یک جفت آغازگر که به ترتیب برای آلل جهش یافته و آلل طبیعی طراحی شده، استفاده می­گردد. (تصویر٣-٢) پس از انتخاب جفت آغازگرها به منظور اطمینان از ویژگی آنها دراتصال به ناحیه مکملی خود در ژن مربوطه، توالی آغازگرها با تمامی توالی ژنوم انسان در پایگاه اطلاعاتی Gene Bank مقایسه گردید. به منظور افزایش ویژگی جفت آغازگرهای اصلی، علاوه بر عدم تطابق انتهای’ ۳،۲ یا ۳ آلل در انتهای ۳َ از پرایمرهای داخلی را تغییر می­دهیم تا از اتصال احتمالی آن آغازگر به آلل مخالف ممانعت به عمل آید. (۴۶)

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

در این آزمون برای شناسایی پلی مورفیسم ۲۴۲۵۵۷ rsاز ژن MAPT ,تکنیک Tetra ARMS/PCR استفاده شد. در این تکنیک ما از ۴ پرایمر استفاده کردیم که خصوصیات کلی آنها در جدول زیر گزارش شده است.
جدول ١-٣مشخصات کلی پرایمرها