• غشای دیالیز (Dialysis membrane)

• بن ماری ۳۷ تا ۴۲ درجه سانتیگراد ( ۳۷ degree water bath)

• سمپلرهای ۱۰، ۱۰۰ و ۱۰۰۰ میکرولیتر Sampler))

• میکروتیوپ ۵/۱ میلی لیتر Microtube))

• لوله فالکن ۱۵ و ۵۰ میلی لیتر (Falcon)

• دستگاه یخ ساز (Ice maker)

۳-۲- محلول ها و بافرها
۳-۲-۱- تهیه ی استوک آمپی سیلین
۱۰۰ میلی گرم آمپی سیلین را در ۱ میلی لیتر آب مقطر استریل حل کرده تا غلظت نهایی آن به mg/ml 100 برسد. پس از تهیه، آن را به حجم های کوچکتر تقسیم کرده و در فریزر ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کردیم.
۳-۲-۲- تهیه ی استوک IPTG
۰۵۹۵/۰ میلی گرم IPTG را در ۱ میلی لیتر آب مقطر استریل حل کرده تا غلظت نهایی آن به mM 250 برسد. پس از تهیه آن را به حجم های کوچکتر تقسیم کرده و در فریزر ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کردیم.
۳-۲-۳- تهیه ی بافر لیز کننده سلول جهت بررسی حلالیت پروتئین
۹۶/۱ گرم Tris-Hcl و۹۲/۲ گرم NaCl را وزن کرده و در ۵۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کردیم تا غلظت نهایی هرکدام در محلول به ترتیبب ۲۵ و ۱۰۰ میلی مولار باشد (PH 8 ).
۳-۲-۴- تهیه ی بافر لیز کننده سلول جهت تخلیص پروتئین
این محلول حاوی ۱۰% گلیسرول، ۹۷/۲ گرم HEPES و۹۲/۲ گرم NaCl می باشد که در ۵۰۰ میلی لیتر آب مقطر تهیه گردید. غلظت نهایی HEPES و NaCl در این محلول به ترتیب ۲۵ و ۱۰۰ میلی مولار بود(PH 8 ).
۳-۲-۵- تهیه ی محلول ژل پلی آکریل آمید ۴%
۱/۶ میلی لیتر آب مقطر دیونیزه، ۳/۱ میلی لیتر از محلول آکریل آمید- بیس آکریل آمید ۳۰% ، ۵/۲ میلی لیتر از ژل بافر Tris-Hcl 5/0 مولار و ۱/۰ میلی لیتر از محلول SDS 10% را ترکیب نموده و با اضافه نمودن ۵۰ میکرولیتر APS10% و۱۰ میکرولیتر TEMEDبه محلول آن را به عنوان ژل Stacking استفاده کردیم.
۳-۲-۶- تهیه ی محلول ژل پلی آکریل آمید ۱۲%
۴/۳ میلی لیتر آب مقطر دیونیزه، ۴ میلی لیتر از محلول آکریل آمید- بیس آکریل آمید ۳۰% ، ۵/۲ میلی لیتر از ژل بافر Tris-Hcl 5/1 مولار و۱ /۰ میلی لیتر از محلول SDS 10% را ترکیب نموده و با اضافه نمودن ۵۰ میکرولیتر APS10% و۵ میکرولیتر TEMEDبه محلول آن را به عنوان ژل Resolving استفاده کردیم.
۳-۲-۷- تهیه ی محلول APS10%
برای تهیه ی این محلول ۱۰۰ میلی گرم آمونیوم پرسولفات را در ۱ میلی لیتر آب دیونیزه حل کردیم.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳-۲-۸- تهیه ی بافر الکترود x10 (Running buffer)
۳/۳۰ گرم Tris base، ۱۴۴ گرم گلایسین، ۱۰ گرم SDS را در ۱۰۰۰ میکرولیتر آب دیونیزه حل کرده و در دمای ۴ درجه سانتیگراد ذخیره کردیم (PH 8.3 ).
۳-۲-۹- تهیه ی بافر نمونه Sample Buffer))
این محلول حاوی ۵۵/۳ میلی لیتر آب دیونیزه، ۲۵/۱ میلی لیتر Tris-Hcl 5/0 مولار، ۵/۲ میلی لیتر گلیسرول، ۲ میلی لیتر SDS 10%، ۲/۰ میلی لیتر بروموفنول بلو ۵/۰ % و ۵۰ میکرولیتر بتا-مرکاپتواتانول است که حجم نهایی محلول به ۱۰ میلی لیتر رسانده شد و در دمای اتاق نگهداری گردید.
۳-۲-۱۰- تهیه ی محلول Tris-Hcl 5/0 مولار
۶ گرم Tris base به ۶۰ میلی لیتر آب دیونیزه اضافه گردید و با افزودن مقدار مناسبی از HCl به محلول PH روی ۸ /۶ تنظیم گردید و حجم نهایی به ۱۰۰ میلی لیتر رسانده شد و در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری گردید.
۳-۲-۱۱- تهیه ی محلول Tris-Hcl 5/1 مولار
۲۳/۲۷ گرم Tris base به ۸۰ میلی لیتر آب دیونیزه اضافه گردید و با افزودن مقدار مناسبی از HCl به محلول PH روی ۸ /۸ تنظیم گردید و حجم نهایی به ۱۵۰ میلی لیتر رسانده شد و در دمای۴ درجه سانتیگراد نگهداری گردید.
۳-۲-۱۲- تهیه ی Staining Buffer
برای تهیه ی ۱۰۰ میلی لیتر از این بافر به میزان ۵۰ میلی لیتر متانول با ۰۵/۰ گرم کماسی بلو،۱۰ میلی لیتر استیک اسید و ۴۰ میلی لیتر آب مقطر استفاده گردید.
۳-۲-۱۳- تهیه ی Destaining Buffer
برای تهیه ی ۱۰۰ میلی لیتر از این بافر به میزان ۵ میلی لیتر متانول با ۷ میلی لیتر استیک اسید و ۸۸ میلی لیتر آب مقطر استفاده گردید.
۳-۲-۱۴- تهیه ی محلول آکریل آمید- بیس آکریل آمید
۶/۸۷ گرم آکریل امید با ۴/۲ گرم بیس آکریل آمید را در ۳۰۰ میلی لیتر آب دیونیزه حل کرده و پس از فیلتر کردن در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری گردید.
۳-۲-۱۵- تهیه بافر SDS
برای تهیه ی ۱۰ میلی لیتر از این بافر، ۱۰ گرم SDS را در ۵ میلی لیتر آب مقطر حل کرده و سپس به حجم ۱۰ میلی لیتر رساندیم. این محلول در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری شد.
۳-۲-۱۶- تهیه بافرA (Washing Buffer)
۹۵/۵ گرم HEPES، ۸۴/۵ گرم NaCl و ۳۶/۱ گرم Imidazole را در ۱ لیتر آب مقطر حل کرده تا غلظت نهایی به ترتیب ۲۵ ، ۱۰۰ و ۱۰ میلی مولار باشد سپس محلول را در دمای ۴ درجه سانتیگراد ذخیره کردیم(PH7.5 ).
۳-۲-۱۷- تهیه بافر B ( (Eluting Buffer
۹۵/۵ گرم HEPES، ۸۴/۵ گرم NaCl و ۶۸ گرم Imidazole را در ۱ لیتر آب مقطر حل کرده تا غلظت نهایی به ترتیب ۲۵ ، ۱۰۰ و ۱۰۰۰ میلی مولار باشد، سپس محلول را در دمای ۴ درجه سانتیگراد ذخیره کردیم(PH7.5 ).
۳-۲-۱۸- تهیه بافر دیالیز
۶۸/۱۵ گرم Tris-Hcl و ۳۶/۲۳ گرم NaCl را در ۴ لیتر آب مقطر حل کرده تا غلظت نهایی به ترتیب ۲۵ و ۱۰۰ میلی مولار باشد، سپس محلول را در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری نمودیم (PH 7.5 ).
۳-۲-۱۹- تهیه استوک گوانیدین هیدروکلراید (GnHCl)
۲۵/۴۸ گرم گوانیدین هیدروکلراید را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کردیم تا غلظت نهایی به ۸ مولار برسد.